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蛋白胨用途

螺旋藻蛋白胨用于細菌培養基的用途

時間:2021-11-23 16:50:31 點擊:606次

    做醫學研究或者食品生物工程的都知道,蛋白胨在細菌培養基主要作為氮源, 也可作為碳源, 是細菌培養基應加入的營養物質,是目前培養基中的主要營養物質。目前實驗室主要使用日本蛋白胨培養細菌,其價格較昂貴。為了進一步尋找價格便宜的新的優質蛋白胨, 我們嘗試從螺旋藻中提取蛋白, 再酶解成蛋白胨, 作細菌生長試驗。


    取螺旋藻干粉 10g 調成糊狀, 充分研磨;加入 DH2O 200ml, 充分攪拌, 置 LXJ-Ⅱ離心沉淀機 3800r/ min離心 25min , 再充分混勻;置 -35 ℃冰箱 4h , 取出置室溫自然融解, 反復4次。 置 LXJ-Ⅱ離心沉淀機 300r/min 離心 15min。 取上清液量其體積, 并取2ml 用凱氏定氮法〔4〕測量蛋白含量;將上清液 pH 調至 5. 0 , 置 50℃水浴箱中,加入木瓜蛋白酶液 2ml, 水解40h;將水解液 pH 調至4.0 , 加熱煮沸 1min,過濾, 量其體積, 并取 2ml 用凱氏定氮法測量蛋白胨含量。 按常規普通瓊脂平板配制法〔5〕, 用水解液代替蛋白胨配制培養基, 制成平板( S1);將上列 8 種菌分別接種于S1 上, 37 ℃培養 18h 后觀察細菌生長情況。 與分別用日本蛋白胨 ( S2), 水解酪蛋白 ( S3) 和胰蛋白胨 ( S4) 制成的普通瓊脂平板作生長對照試驗。


螺旋藻蛋白胨用于細菌培養基


    破壁蛋白釋放量占干重的 62.3%;水解后氨基酸量占干重的 51. 5%;四種培養基細菌菌落均為光滑型。螺旋藻干粉是一種高蛋白食品 。 其蛋白含量占干重 60 % ~ 70 % , 富含16 種氨基酸 , 并且螺旋藻生長周期短 ,光能轉換率高 , 價格便宜 , 易大量獲得 , 故我們選擇它來制作蛋白胨 。破壁的好壞是關系到蛋白產量的一個關鍵因素 。 我們參照顧林梯等的方法 , 并作一定的改進 , 即把研磨、 高速離心和凍融結合使用以提高破壁率 ,達到了高的蛋白產量 。 單獨采用研磨和凍融的方法 , 蛋白產量較低 , 僅占干重的 21.3 %。 單獨采用高速離心 , 蛋白產量也較低 。


    采用木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白,主要是因為該蛋白應歸類為植物蛋白 , 而木瓜蛋白酶常用于水解植物蛋白以獲得較多的游離氨基酸 。從培養結果看 , 在加入用該酶水解的蛋白胨的細菌培養基中細菌生長良好。 我們曾試驗用胰蛋白酶水解螺旋藻蛋白 , 但將該酶水解物加入培養基中 , 細菌生長不良。 故認為木瓜蛋白酶是水解螺旋藻蛋白較好的一種酶。


    從細菌生長試驗的結果看 , 螺旋藻蛋白胨對肺炎鏈球菌這種營養要求較高的細菌生長作用強于三種對照蛋白胨,對金黃色葡萄球菌等幾種營養要求較低的細菌與日本蛋白胨和胰蛋白相當 , 強于水解酪蛋白 。 故認為該蛋白胨能提供細菌生長所需的氮源和碳源 , 螺旋藻可解離出一種新的廉價的優質蛋白胨 。


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